【摘要】該研究成果于2022年6月作為重慶市地方標準發(fā)布，填補重慶地區(qū)該病核酸檢測技術(shù)空白,。
山羊地方性鼻腺瘤（ENA）是由山羊地方性鼻內(nèi)腫瘤病毒（ENTV-2）引起的一種慢性,、進行性、接觸性的動物傳染病,。因該病初期癥狀不易觀察,，且目前尚無可用的疫苗和治療藥物，導致ENA的早期診斷和綜合防控困難,。2015年以來,，我們在重慶市酉陽縣多個羊場發(fā)現(xiàn)該病例后,，此病開始流行并產(chǎn)生危害。
為此,，草業(yè)研究所項目組進行臨床樣品采集,，根據(jù)ENTV-2保守區(qū)設(shè)計特異性的引物，經(jīng)過病毒RNA提取和反轉(zhuǎn)錄,，合適染料的選擇,，引物濃度優(yōu)化，PCR反應條件和熒光定量PCR（qPCR）反應條件優(yōu)化等一系列實驗室研究,，并對比SYBR Green I和常規(guī)PCR兩種方法,，對其特異性、靈敏度,、重現(xiàn)性進行了測定,。結(jié)果表明EvaGreen qPCR對檢測ENTV-2具有很好的重復性、特異性和敏感性,，可用作ENTV-2核酸檢測,，是一種有效診斷山羊ENA的臨床工具，為山羊ENA的防控打好了基礎(chǔ),。
該研究成果“ENTV-2 EvaGreen熒光定量PCR檢測方法”相關(guān)文章于2019年2月發(fā)表在《Molecular and Cellular Probes》雜志,，并于2022年6月作為重慶市地方標準發(fā)布，填補重慶地區(qū)該病核酸檢測技術(shù)空白,。
圖1 qPCR引物的設(shè)計
圖2EvaGreen qPCR的擴增曲線
圖3 EvaGreen qPCR的標準曲線
圖4 EvaGreen qPCR的熔解曲線