近年來,，由奇異變形桿菌（P.mirabilis）和普通變形桿菌（P.vulgaris）引起的人和動物發(fā)病的報道逐年增多,。最新的報道顯示,，在我國有4%的食源性公共衛(wèi)生事件是由P. mirabilis和P.vulgaris引起的,。同時,，它們對各種動物也有較強的致病性,，從九十年代開始就有關(guān)于P.mirabilis和P. vulgaris引起各種畜禽發(fā)病甚至死亡的報道,。由于P.mirabilis和P. vulgaris對人和動物具有的危害性,，我國在1996年由衛(wèi)生部正式公布了“變形桿菌食物中毒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則（WS/T 9-1996）”，2010年由中國檢驗檢疫科學(xué)研究院制定了在乳制品中檢測P.mirabilis和P.vulgaris的方法（SN/T 2552.8-2010）,，2011年由中華人民共和國天津出入境檢驗檢疫局制定了從蠅類,、蜚蠊中檢測P.mirabilis和P. vulgaris的方法（SN/T 3064.5-2011）。這些標(biāo)準(zhǔn)的公布與實行,，對食品安全和公共衛(wèi)生有著十分重要的作用,。但在這些標(biāo)準(zhǔn)中所采用的檢測方法為生化鑒定和16SrRNA測序，在實際操作中費時費力。目前,，熒光定量PCR技術(shù)已經(jīng)在微生物的檢測廣泛的應(yīng)用,，其靈敏性、可靠性和簡便性已經(jīng)得到證實,。因此建立一種可以快速,、準(zhǔn)確的檢測和區(qū)分P. mirabilis和P. vulgaris的熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)方法，對于疾病的診斷,、食品安全和公共衛(wèi)生有著十分重要的意義,。
為解決P.mirabilis和P.vulgaris難以快速檢測和區(qū)分的問題，我院獸醫(yī)獸藥研究所建立了P. mirabilis和P. vulgaris的Real-Time PCR檢測方法,。該方法采用了雙重TaqMan Real-Time PCR技術(shù),，針對P.mirabilis和P.vulgaris的目標(biāo)基因設(shè)計了4條特異性引物和2條帶有不同熒光基團的特異性探針，在FAM通道檢測P.mirabilis,，在HEX通道檢測P.mirabilis,，在菌液中對P.mirabilis和P.vulgaris的檢測極限為：6.08×102 CFU/mL和4.46×102 CFU/mL，使得P.mirabilis和P.vulgaris的檢測和區(qū)分可以同時進行,，是一個特異性強,、靈敏性高、方便實用的技術(shù),。且該檢測方法在2022年12月獲重慶市地方標(biāo)準(zhǔn)批準(zhǔn)發(fā)布,，編號DB50/T 1298-2022，該標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)布為P.mirabilis和P.vulgaris的快速檢測和區(qū)分提供了技術(shù)支持,，有重要的公共衛(wèi)生意義。
圖 P.mirabilis和P.vulgaris的靈敏度檢測結(jié)果
FAM通道用于檢測P.mirabilis,，“S”型擴增曲線從左到右濃度為6.08 × 107 ~ 6.08 × 102 CFU/mL,；Hex通道用于檢測P.vulgaris，S”型擴增曲線從左到右濃度為4.46 × 107 ~ 4.46×102 CFU/mL