山羊痘是由山羊痘病毒（goat pox virus,，GTPV）引起的一種急性接觸性傳染病,，嚴(yán)重影響動物的采食和生長,，造成羊毛和皮革質(zhì)量下降,，甚至導(dǎo)致患病動物的死亡,，給養(yǎng)羊業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失,，是養(yǎng)羊業(yè)中重點(diǎn)防控的一種疫病,。國內(nèi)以GTPV AV41株制作的疫苗用于山羊的注射免疫，為防控山羊痘取得良好效果,。
我院獸醫(yī)獸藥研究所生物制品研發(fā)團(tuán)隊(duì)基于原代細(xì)胞培養(yǎng)的病毒具有高敏感性和高病毒滴度的優(yōu)勢,，研究分離了山羊睪丸原代細(xì)胞作為宿主細(xì)胞，借助長時間動態(tài)細(xì)胞成像系統(tǒng)及數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)采集細(xì)胞圖像,、通過熒光定量PCR等檢測方式,，評估GTPV AV41在不同日齡山羊原代睪丸細(xì)胞中的傳代培養(yǎng)特性、細(xì)胞病變效應(yīng)和增殖效率,。研究結(jié)果表明,，7日齡和60日齡原代山羊睪丸細(xì)胞的最大傳代次數(shù)為7代，之后傳代再無法長滿至單層,，在最大傳代次數(shù)之前,，兩種細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)并無差異，呈現(xiàn)出不規(guī)則的多邊形,。數(shù)據(jù)分析顯示,，對第2代細(xì)胞每隔6h采集一次細(xì)胞圖片，計(jì)算出細(xì)胞生長的融合度,，結(jié)果顯示7日齡和60日齡的原代睪丸細(xì)胞均在38h左右達(dá)到細(xì)胞最大融合度,，分別為94.2%和89.0%。在38h后,，細(xì)胞老化造成細(xì)胞脫落,，細(xì)胞融合度開始下降。兩種細(xì)胞接種GTPV后均能產(chǎn)生細(xì)胞病變,，但是發(fā)生病變的時間以及病變特征上存在差別,。7日齡細(xì)胞在接種GTPV 84h后，細(xì)胞病率變達(dá)到90%以上,，細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)不規(guī)則的形狀,，細(xì)胞間質(zhì)變大、脫落,，出現(xiàn)明顯的交織拉網(wǎng)現(xiàn)象,，90h時細(xì)胞間質(zhì)進(jìn)一步變大、脫落,。60日齡的細(xì)胞在接種GTPV 84h后出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變,，細(xì)胞變圓，細(xì)胞間出現(xiàn)明顯的聚團(tuán),，但與7日齡細(xì)胞比較,，細(xì)胞間交織拉網(wǎng)現(xiàn)象明顯減少，到90h時,，細(xì)胞出現(xiàn)交織拉網(wǎng),、脫落的現(xiàn)象,。7日齡和60日齡羊睪丸細(xì)胞感染GTPV疫苗株48h、72h,、96h后,，病毒拷貝數(shù)對應(yīng)為2884、5128,、8912 copies/μL,，1622、3090,、10715 copies/μL,。綜上，無論是7日齡還是60日齡山羊睪丸細(xì)胞在感染GTPV后都會發(fā)生細(xì)胞病變,，且GTPV在60日齡細(xì)胞的增殖效率要高于7日齡細(xì)胞,。
該項(xiàng)研究通過實(shí)時監(jiān)測細(xì)胞狀態(tài)，對細(xì)胞病變效應(yīng)進(jìn)行定性和定量分析,，深入了解病毒在山羊睪丸原代細(xì)胞中的生物學(xué)特性和感染過程,，為山羊痘病毒弱毒疫苗株的培養(yǎng)提供了可行方案，也為山羊痘疫苗生產(chǎn)和山羊痘防控工作提供了重要的科學(xué)依據(jù),。
