化膿隱秘桿菌感染發(fā)生在世界各地的家畜和野生動物中,，大多數(shù)已報道的感染與豬,、牛、羊等經(jīng)濟(jì)動物有關(guān),?；撾[秘桿菌是動物皮膚、上呼吸道,、泌尿生殖道黏膜生物群的一部分,，同時也是一種重要的機(jī)會性病原體，通常經(jīng)皮膚,、黏膜破損處入侵機(jī)體,，引起動物多種組織器官的化膿性或壞死性病變，如肺炎,、肝膿腫、乳腺炎,、心內(nèi)膜炎,、子宮內(nèi)膜炎、流產(chǎn),、死胎,、腦膿腫,、關(guān)節(jié)膿腫、牙周炎,、皮膚膿腫,、淺表淋巴結(jié)膿腫等，給豬,、牛,、羊等產(chǎn)業(yè)帶來較大經(jīng)濟(jì)損失?；撾[秘桿菌感染常轉(zhuǎn)化成慢性消耗性疾病,，且多為混合感染，臨床診斷困難,。目前,，化膿隱秘桿菌感染診斷主要依賴病原菌分離培養(yǎng)和核酸檢測等，缺少血清學(xué)診斷方法,。
溶血素(Pyolysin, PLO)是化膿隱秘桿菌各菌株均分泌的外毒素,，菌株毒力與plo基因的表達(dá)水平有關(guān)，表達(dá)水平高的菌株毒力更強(qiáng),。PLO也是化膿隱秘桿菌的特異性保守抗原,，PLO抗體水平具有反映感染所造成的組織損傷的潛力。
我院獸醫(yī)獸藥研究所生物藥物研發(fā)創(chuàng)新團(tuán)隊使用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)和Ni-Sepharose親和層析制備重組PLO,，采用方陣滴定法確定最佳重組PLO包被濃度及最佳二抗稀釋度,，建立了檢測山羊化膿隱秘桿菌PLO抗體的間接 ELISA方法。該方法不與大腸桿菌,、金黃色葡萄球菌,、鏈球菌、偽結(jié)核棒狀桿菌等常見混合感染病原菌抗血清發(fā)生交叉反應(yīng),，可檢測出1:800稀釋的陽性血清,，批內(nèi)和批間變異系數(shù)（CV）均 < 10 %，表現(xiàn)出具有良好的特異性,、靈敏性,、穩(wěn)定性及精密性。該方法能用于大樣本檢測和篩查,，為化膿隱秘桿菌感染的精準(zhǔn)防控提供了準(zhǔn)確便捷的診斷方法和技術(shù)支撐,。
重組蛋白的純度檢測
M：蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1：rPLO