近日，重慶市畜牧科學(xué)院開發(fā)了針對豬流行性腹瀉病毒S1S2J蛋白的抗體并建立了一種簡便的小鼠單克隆抗體類型鑒定方法,，相關(guān)研究結(jié)果發(fā)表于《AMB Express》2023年第13卷第1期,。
豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起的，影響所有年齡的豬,。該病以嘔吐,、急性腹瀉和脫水為特征，新生兒仔豬死亡率高,，給養(yǎng)豬業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失,。PEDV是冠狀病毒科的一員，是一種包膜單鏈RNA病毒,，其表面的刺突(S)蛋白易發(fā)生突變，可以誘導(dǎo)病毒中和抗體,。PEDV根據(jù)其S蛋白的變異可分為基因1型 (G1)和基因2型（G2）,。G1型包括經(jīng)典菌株(如原型菌株CV777)， G2型包含了S基因的各種插入和刪除突變,。這些突變導(dǎo)致了許多目前基于S蛋白的抗體實現(xiàn)不能有效的診斷或保護,。因此，開發(fā)可用于PEDV感染綜合研究的抗體至關(guān)重要,。
S1/S2連接（S1S2J）切割位點被認為是S蛋白中相對保守的區(qū)域,。有研究表明，S1/S2連接切割位點是蛋白酶介導(dǎo)冠狀病毒入侵細胞的主要決定因素之一,。因此,，重慶市畜牧科學(xué)院所開發(fā)的靶向豬流行性腹瀉病毒S1S2J蛋白的抗體，特異性的選擇了PEDV-AJ1（G2型代表性菌株）的S1S2J蛋白作為靶蛋白,，利用Expi293真核表達系統(tǒng)制備了S1S2J蛋白抗原,，對小鼠進行免疫，通過經(jīng)典的雜交瘤技術(shù)篩選并獲得了三株具有高結(jié)合活性的IgM型單克隆抗體（mAb）,，分別為3-5G,7-9D和8-3B,。
研究結(jié)果揭示了這些mAb的特征，三種抗體均屬于IgM型,，抗原表位為線性,，流式和間接免疫熒光驗證了三種抗體能夠與感染PEDV-SP-C株（G1型）的Vero E1細胞結(jié)合，ELISA法測定了三種抗體的EC50值分別為26.293μg/mL, 14.337μg/mL和62.984 μg/mL,。這些mAb可用作診斷試劑的檢測抗體或科研用抗體,。同時，我們還建立了一種簡便的小鼠單克隆抗體類型鑒定方法，利用特異性引物區(qū)分小鼠免疫球蛋白的不同類型,，可用于鑒定小鼠mAb的不同類型,。該研究結(jié)果為PEDV相關(guān)研究奠定了良好的基礎(chǔ)。
PEDV-S1S2J抗體的制備
PEDV-S1S2J抗體的功能驗證